如何进行复方环磷酰胺片含量测定?

复方环磷酰胺片在体外无抗肿瘤活性，进入体内后先在肝脏中经微粒体功能氧化酶转化成醛磷酰胺，而醛磷酰胺不稳定，在肿瘤细胞内分解成磷酰胺氮芥及丙烯醛，磷酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。那如何进行复方环磷酰胺片含量测定?

取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称出适量(约相当于环磷酰胺0.3g)置100ml量瓶中，加乙醇适量，充分振摇使环磷酰溶解，加乙醇至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液50ml，加5%氢氧化钠溶液40ml，加热回流2小时，放冷至室温，加硝酸溶液(1→2)10ml使酸化，精密加硝酸银滴定液(0.1mol/L)15ml，摇匀，加硝基苯5ml，强力振摇，再加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，即得(每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于13.96mg的C7H15N2O2Cl2P?/FONT>H2O)。

人参茎、叶总皂苷对照品溶液的制备精密称量60℃减压干燥3小时的人参皂苷Re对照品适量，置量瓶中，加甲醇溶解，制成每1ml中约含2mg的溶液作为对照品溶液。

测定法：取本品20片，除去包衣，干燥，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于人参茎、叶总皂苷40mg)，置25ml量瓶中，加甲醇适量，振摇20分钟，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液与对照品溶液各50μl，分别加入10ml具塞量筒或试管(预先置冰浴内)中，精密加入新配制的1%香草醛高氯酸溶液0.5ml，混匀，于60℃水浴中加热15分钟，取出并立即放入10℃以下水中，冷却1分钟，精密加入硫酸溶液(23ml水加入77ml硫酸)5ml，摇匀，放置，待气泡消失后，慢慢倾入比色杯中，以试剂同样操作为空白计算，于540nm的波长处测定吸收度，按两者吸收度的比值计算，结果乘以0.84，即得。