PCR检测是一种分子生物学技术,全称为聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction,主要用于扩增特定DNA片段。该技术通过模拟DNA自然复制过程,在体外快速合成目标基因序列,具有高灵敏度、高特异性和高效率的特点。
PCR检测的核心步骤包括变性、退火和延伸三个循环阶段。在95℃高温下,双链DNA解旋为单链;随后降温至50-65℃,引物与目标序列特异性结合;最后在72℃条件下,DNA聚合酶沿模板合成新链。经过30-40次循环后,目标DNA片段可扩增数百万倍。
该技术主要应用于病原体检测如新冠病毒、乙肝病毒、遗传病诊断、亲子鉴定、法医物证分析等领域。在传染病防控中,实时荧光定量PCRqPCR能同步完成扩增和检测,通过荧光信号变化实现病原体核酸的定量分析,检测限可达1-10拷贝/毫升。
样本类型包括咽拭子、血液、组织等,检测时长通常为2-4小时。需在生物安全二级实验室进行操作,防止气溶胶污染。假阴性结果可能源于样本采集不当、病毒变异或抑制剂存在,假阳性多由实验室污染导致。
特殊情况下需采用数字PCRdPCR或逆转录PCRRT-PCR等衍生技术。目前PCR技术已发展至第三代,如微流控芯片PCR可在30分钟内完成检测。该技术仍是分子诊断的金标准,但需结合临床症状和其他检查综合判断。